近年來對臭氧滅菌在制藥、生物工程、遺傳工程等行業(yè)中的應(yīng)用有大量的報(bào)道，在我國藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范中臭氧滅菌也是被推薦的滅菌方法之一，國家《消毒技術(shù)規(guī)范》中明確提出臭氧是一種廣譜殺菌劑，可殺滅細(xì)菌繁殖體、芽孢、病毒和真菌等，破壞肉毒桿菌毒素，這充分地說明了臭氧的滅菌原理和特點(diǎn)，同時(shí)也為我們在制藥過程中提供了一種全新的滅菌方法。盡管這種方法已被人們所接受，但在具體應(yīng)用中，絕大多數(shù)制藥企業(yè)僅用于對生產(chǎn)環(huán)境的滅菌，而在對生產(chǎn)設(shè)備、容器具、反應(yīng)釜、貯罐和輸液、輸料、輸氣管道及內(nèi)包裝材料、工作服、工藝用水等滅菌中，還沒有得到廣泛的應(yīng)用。本文著重介紹臭氧在非無菌液體制劑生產(chǎn)過程中對生產(chǎn)設(shè)備、容器具、貯罐和輸液、輸料管道滅菌的經(jīng)驗(yàn)。

　　1 非無菌液體制劑微生物控制現(xiàn)狀

　　非無菌液體制劑在整個(gè)藥品制劑中占有很大的比例，如合劑、糖漿劑、溶液劑及外用洗劑等。水性液體藥劑易被微生物污染，尤其是含有糖類、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)更易被污染，在我國液體制劑中絕大部分為中藥制劑，其含有大量的糖類、蛋白質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)。2010版《中國藥典》對非無菌液體制劑的染菌限度作了嚴(yán)格的規(guī)定：細(xì)菌、霉菌、酵母菌1mL藥液內(nèi)不超過100個(gè)CFU，并不得檢出大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、活螨及螨卵等，該類藥物為非最終滅菌制劑，因此需要在生產(chǎn)過程中對每一個(gè)環(huán)節(jié)微生物污染的程度進(jìn)行嚴(yán)格控制，來降低最終成品的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。在非無菌液體制劑的生產(chǎn)過程中，除對原輔料、內(nèi)包裝材料、中間產(chǎn)品及生產(chǎn)環(huán)境、工藝用水的微生物加以控制外，重點(diǎn)應(yīng)防止生產(chǎn)設(shè)備、工具、容器、貯罐和輸液、輸料管道對產(chǎn)品的污染，其滅菌是否可靠，將決定成品微生物數(shù)量是否合格。

　　一般液體制劑的生產(chǎn)過程由多個(gè)生產(chǎn)環(huán)節(jié)組成，有各種設(shè)備、容器、管道、閥門、儀表等復(fù)雜部件連接在一起。傳統(tǒng)消毒滅菌一般用75％乙醇浸泡或用純蒸汽通過管道、容器來進(jìn)行。用75％乙醇浸泡需大量的乙醇，使生產(chǎn)成本提高許多，一般企業(yè)很難做到；最可靠的方法是用純蒸汽對生產(chǎn)線進(jìn)行消毒滅菌，而對于規(guī)模較小的一些非無菌制藥企業(yè)來講，要得到純蒸汽也是件不容易的事情。

　　資料表明，臭氧具有很強(qiáng)的殺菌作用。臭氧的滅菌原理：臭氧在常溫、常壓下分子結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定，很快自行分解成氧氣和單個(gè)氧原子；后者具有很強(qiáng)的活性，對細(xì)菌有極強(qiáng)的氧化作用，臭氧氧化分解了細(xì)菌內(nèi)部氧化葡萄糖所必須的酶，從而破壞其細(xì)胞膜，將它殺死，多余的氧原子則會(huì)自行重新結(jié)合成為普通氧分子，不存在任何有毒殘留物，無死角，故稱無污染滅菌劑，它不但對各種細(xì)菌（包括大腸桿菌、綠膿桿菌及雜菌等）有極強(qiáng)的殺滅能力，而且對殺死霉菌也很有效?！断炯夹g(shù)規(guī)范》中提出“臭氧對物品表面上的微生物有殺滅作用”。因此，用臭氧滅菌既可靠又經(jīng)濟(jì)，同時(shí)產(chǎn)品質(zhì)量也可得到保證。

　　2 臭氧滅菌實(shí)驗(yàn)

　　根據(jù)本企業(yè)的實(shí)際情況，2007年12月起我公司采用臭氧對非無菌液體制劑生產(chǎn)線進(jìn)行在線滅菌實(shí)驗(yàn)，主要針對生產(chǎn)線上濃配罐、稀配罐、高位槽、灌裝設(shè)備以及物料管道和生產(chǎn)用容器具等。

　　2.1實(shí)驗(yàn)用設(shè)備

　　我司自主研發(fā)的臭氧發(fā)生器，自帶壓縮機(jī)、配置閥門及活結(jié)，可自由移動(dòng)，通過管路將高濃度的臭氧氣體輸入需滅菌的容器或管道內(nèi)達(dá)到滅菌效果。我公司采用高濃度臭氧發(fā)生器YT-016-40A，其產(chǎn)量為40g/h，出口臭氧濃度80mg/L，功率為1.1kW。

　　2.2實(shí)驗(yàn)方法

　　由于整條生產(chǎn)線從配制到灌裝之間，管線和設(shè)備連接復(fù)雜，而配制和灌裝不在同一操作間，管線連接較長，為使滅菌徹底，操作方便，故采用臭氧發(fā)生器流動(dòng)使用，對不同的生產(chǎn)單元進(jìn)行滅菌。對于臭氧不易通過的部件，進(jìn)行拆卸并用75％乙醇浸泡，而易通過的部件分別通過活結(jié)或軟管進(jìn)行連接，并按操作程序連接好臭氧發(fā)生器，開啟臭氧滅菌。滅菌過程中對于不能完全密封的單元，則采用臭氧發(fā)生器連續(xù)工作，產(chǎn)生高濃度臭氧滅菌，以保證其可靠性。

　　實(shí)驗(yàn)表明：若被滅菌物表面濕度＞80％滅菌效果會(huì)更好，因此，在滅菌之前需用工藝用水對需滅菌系統(tǒng)進(jìn)行沖洗。為防止滅菌后產(chǎn)生二次污染，使用臭氧滅菌前先對所在潔凈區(qū)環(huán)境滅菌。在滅菌過程中，對于密封單元開啟臭氧發(fā)生器工作1h，保留1h；對于不能完全密封單元，采用臭氧發(fā)生器連續(xù)工作2h滅菌。

　　2.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論

　　通過對該滅菌方法的驗(yàn)證，經(jīng)測試均符合設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)，達(dá)到了滅菌效果。我們對2年來生產(chǎn)的上百批產(chǎn)品和以往產(chǎn)品進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)從2008年開始使用臭氧滅菌后，產(chǎn)品一次合格率高達(dá)100%，而以往僅達(dá)85%左右。使用臭氧滅菌前，常會(huì)出現(xiàn)成品微生物超標(biāo)而返工，造成企業(yè)生產(chǎn)成本的提高。而現(xiàn)在徹底改變了我公司液體制劑微生物超標(biāo)和返工的現(xiàn)象，使產(chǎn)品的質(zhì)量得到了保證，降低了企業(yè)的生產(chǎn)成本。

　　3 臭氧發(fā)生器選型及滅菌效果驗(yàn)證

　　由于市面上臭氧發(fā)生器型號較多，我們根據(jù)實(shí)際生產(chǎn)需要對臭氧發(fā)生器進(jìn)行了選型，一般的評價(jià)指標(biāo)為：臭氧產(chǎn)量、濃度、可靠性、使用壽命、電耗等。由于單元系統(tǒng)滅菌的發(fā)生器的功率比較小，電耗一般不予考慮。對于濃度，由《消毒技術(shù)規(guī)范》知，臭氧濃度一般在60㎎/m3以上，才對物品表面上的微生物有殺滅作用，而設(shè)備內(nèi)部一般濃度在5×10-5以上才進(jìn)行滅菌，表面濕度大滅菌效果會(huì)更好。

　　在選用設(shè)備時(shí)，臭氧產(chǎn)量是最重要參考依據(jù)，我們應(yīng)根據(jù)滅菌空間和滅菌濃度進(jìn)行計(jì)算。例如，經(jīng)估計(jì)我們所需要的滅菌空間為100m3，若為密閉容器，要求殺滅管道或設(shè)備內(nèi)表面的微生物，按要求濃度C不低于5×10-5，經(jīng)計(jì)算為84mg/m3，考慮臭氧發(fā)生器的臭氧發(fā)生量在工作1h后自然衰退率S為62.25％，則選擇臭氧發(fā)生器發(fā)生量W（mg/h）：

　　W＝CV/（1－S）＝84×100/（1－62.25％）＝22251mg/h

　　考慮到實(shí)際損耗選用時(shí)不得＜30g/h。

　　在生產(chǎn)過程中為了滅菌徹底，不留死角，常采用臭氧發(fā)生器連續(xù)工作方式，流通臭氧進(jìn)行滅菌，在選用臭氧發(fā)生器時(shí)應(yīng)依據(jù)以上方法進(jìn)行臭氧發(fā)生量的估算，使其產(chǎn)生足夠濃度的臭氧來滅菌。

　　臭氧發(fā)生器的滅菌可靠性和使用壽命與其工作時(shí)間是密切相關(guān)的，可通過滅菌效果驗(yàn)證來確定。

　　臭氧滅菌效果驗(yàn)證過程包括2個(gè)方面：

       (1)臭氧濃度測定：在臭氧發(fā)生器工作一定時(shí)間后，采用化學(xué)分析法或儀器測定法，測定結(jié)果不低于60㎎/m3；

       (2)生物指示劑挑戰(zhàn)性試驗(yàn)：將枯草桿菌黑色變種芽孢菌片置于器皿內(nèi)的滅菌空間內(nèi)，滅菌結(jié)束后取出器皿進(jìn)行培養(yǎng)，并對結(jié)果評價(jià)，應(yīng)＜10CFU/皿。通過以上結(jié)果來確定臭氧發(fā)生器的工作時(shí)間和滅菌時(shí)間。

　　總之，臭氧發(fā)生器的選擇要結(jié)合實(shí)際情況，準(zhǔn)確估算性能參數(shù)，并對其可靠性進(jìn)行周期性再驗(yàn)證，以防止由于設(shè)備原因?qū)е庐a(chǎn)品的質(zhì)量風(fēng)險(xiǎn)。在選購臭氧發(fā)生器時(shí)應(yīng)有備用機(jī)，使用過程中盡可能按“兩用一備，一用一備”的原則購置，備用機(jī)組在設(shè)備維護(hù)或修理過程中交替使用，避免停機(jī)維護(hù)影響正常生產(chǎn)。

　　4 結(jié)語

　　通過以上對非無菌液體制劑生產(chǎn)線滅菌現(xiàn)狀的分析，結(jié)合我公司日常生產(chǎn)中使用臭氧發(fā)生器在線滅菌的經(jīng)驗(yàn)，并經(jīng)過驗(yàn)證和大量實(shí)驗(yàn)考察，采用臭氧發(fā)生器對非無菌液體制劑生產(chǎn)線在線滅菌是一種有效的方法，它解決了產(chǎn)品在生產(chǎn)過程中易受污染的難題，使產(chǎn)品的質(zhì)量得到了有效保證。

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